L’EFSA ha pubblicato una revisione sistematica della letteratura che fa una panoramica completa delle attuali conoscenze relative alla Malattia Emorragica Epizootica (EHD), inclusa la disponibilità di vaccini e test diagnostici.
La malattia emorragica epizootica (EHD) è una malattia virale che colpisce varie specie, con potenziali implicazioni per la salute degli animali, il benessere e la produttività agricola.
Recentemente sono stati rilevati focolai negli allevamenti di molti paesi dell’UE, tra cui Italia (Sardegna), Spagna e, più recentemente, la Francia, dove il numero elevato di casi ha portato a restrizioni nella movimentazione degli animali e a misure specifiche per controllarne la diffusione.
La EHD è una delle malattie elencate nel regolamento (UE) 2016/429 del Parlamento europeo e del Consiglio sulle malattie animali trasmissibili (“legislazione sulla salute animale”). L’EFSA ha quindi il compito di fornire pareri scientifici su cui poi la Commissione possa basare le sue decisioni.
L’Agenzia ha pubblicato quindi in questi giorni una revisione sistematica della letteratura (SLR) per raccogliere in modo completo le conoscenze scientifiche sulle infezioni naturali, quelle sperimentali e sulle valutazioni dei test diagnostici negli animali affetti da EHD. Inoltre, è stata studiata la disponibilità di vaccini per la prevenzione dell’EHD negli ospiti, nonché la disponibilità di test diagnostici volti a rilevare la malattia.
I dati degli articoli idonei per essere inclusi nella revisione della letteratura sono stati analizzati per fornire una panoramica completa delle attuali conoscenze sull’EHD.
Introduzione
Diversi studi hanno descritto infezioni naturali da EHDV. I dati di questi studi sono stati raccolti e analizzati.
I segni clinici degli animali comprendono febbre, salivazione schiumosa, disfagia, esoftalmo, gonfiore della lingua, anoressia, tachicardia, tachipnea, stomatite, difficoltà respiratoria, secrezione nasale, arrossamento/desquamazione del naso e delle labbra, secrezione oculare, linfonodi ingrossati, zoppia, difficoltà a stare in piedi e a camminare, cecità, distacco della placenta, convulsioni, emorragia, necrosi miocardica, depressione grave, idrotorace ed edema polmonare. I reperti necroscopici comprendono microvascolarizzazione polmonare congestionata, emorragia alveolare a macchie, edema alveolare multifocale, atelettasia parziale, emorragia dei muscoli scheletrici, necrosi multifocale dell’epitelio corionico, trombosi intravascolare, cheratite acuta, uveite e ipopion. Alcuni animali non presentavano segni clinici o gravità menzionati.
Gli studi per la sorveglianza attiva sono stati solamente due, rispettivamente negli Stati uniti ed in Australia.
Informazioni sui test diagnostici
Questa sezione fornisce informazioni sui test disponibili per il rilevamento del virus della malattia emorragica epizootica (EHDV) nei ruminanti domestici e selvatici. Include il tipo di campione, il target del test, il sierotipo rilevato, la sensibilità e la specificità del test, le raccomandazioni dell’Organizzazione mondiale per la salute animale (WOAH) e un collegamento a ulteriori informazioni. I test menzionati includono l’isolamento del virus, la reazione a catena della polimerasi con trascrizione inversa in tempo reale (RT-PCR) e il nuovo test di amplificazione isotermica mediata da loop (LAMP).
L’isolamento virale (VI) viene utilizzato per rilevare virus nei ruminanti domestici e selvatici. Il test può rilevare la presenza del virus nel sangue di animali viremici, in campioni di tessuto tra cui milza, polmone e linfonodi di carcasse infette e in Culicoides spp. Se è presente un effetto citopatico che suggerisce la presenza del virus, l’identità dell’isolato può essere confermato mediante RT-PCR, ELISA competitivo, immunofluorescenza o neutralizzazione del virus. Sebbene raccomandato da WOAH, questo test presenta limitazioni per la conferma dei casi clinici e per l’assenza di infezioni da parte dei singoli animali prima dello spostamento.
Per la RT-PCR in tempo reale sono disponibili kit commerciali in grado di rilevare l’RNA di tutti i sierotipi conosciuti di ruminanti domestici e selvatici. Per questo test vengono utilizzati campioni di sangue e altri tessuti. Esistono test mirati al rilevamento degli acidi nucleici dal segmento 9 del genoma del virus. Questi test sono generici per sierotipi noti. Il rilevamento specifico del sierotipo si basa sul segmento 2. Questi test sono specifici per l’EHDV poiché non amplificano nessuno dei 27 sierotipi correlati del virus della febbre catarrale (BTV). La RT-PCR in tempo reale è raccomandata per la conferma dell’assenza di infezione dei singoli animali prima del movimento, oppure è raccomandata ma presenta limitazioni per la conferma dei casi clinici e per la prevalenza della sorveglianza dell’infezione.
Per il test RT-PCR sono disponibili test commerciali che utilizzano come campioni campioni di sangue e altri tessuti di ruminanti domestici e selvatici. Il test prende di mira l’acido nucleico e rileva tutti i sierotipi. È raccomandato dal WOAH ma presenta limitazioni se utilizzato per la conferma di casi clinici, la prevalenza della sorveglianza delle infezioni o la conferma dell’assenza di infezioni da parte di singoli animali prima dello spostamento.
Il nuovo test di amplificazione isotermica mediata da loop (LAMP) può essere condotto su campioni di sangue o tessuti di ruminanti domestici e selvatici e prende di mira l’acido nucleico senza specificare alcun sierotipo particolare. Rispetto alla RT-PCR, il Se della LAMP è stato segnalato essere del 72,2%.
Rilevamento della risposta immunitaria
Nell’ambito del rilevamento della risposta immunitaria, i dati forniti descrivono i test disponibili in commercio per il rilevamento degli anticorpi contro il virus della malattia emorragica epizootica (EHDV) in campioni di siero o plasma di ruminanti domestici e selvatici. I test includono ELISA competitivo, ID Screen EHDV Competition, test di neutralizzazione del virus, test di immunodiffusione su gel di agar e test di fissazione del complemento. Di seguito viene fornita una descrizione narrativa di ciascuna prova.
L’ELISA competitivo è un test disponibile in commercio che rileva gli anticorpi specifici dell’EHDV in campioni di siero/plasma di ruminanti domestici e selvatici. La tecnica utilizza anticorpi monoclonali contro l’EHDV VP7 per rilevare specificamente gli anticorpi specifici del sierogruppo dell’EHDV, senza rilevare anticorpi con reazione crociata verso altri orbivirus. Il test ha una sensibilità dal 90,0% al 91,5% e una specificità dal 95,1% al 99,3% rispetto al test AGID. Il test è raccomandato per valutare la prevalenza della sorveglianza delle infezioni, l’assenza di infezioni da parte di singoli animali prima dello spostamento e il contributo alle politiche di eradicazione e all’assenza di infezioni da parte della popolazione. Tuttavia, presenta dei limiti nel determinare lo stato immunitario dei singoli animali o delle popolazioni dopo la vaccinazione.
I dati del test di neutralizzazione del virus indicano che si tratta di un test che rileva e quantifica gli anticorpi specifici del sierotipo in campioni di siero o plasma di ruminanti domestici e selvatici. Tuttavia, si rileva che possono verificarsi reazioni crociate e che tutti i sierotipi virali sospetti devono essere inclusi nel test, il che può rendere l’esecuzione del test dispendiosa in termini di tempo e lavoro. L’Organizzazione mondiale per la salute animale (WOAH) raccomanda il Test di neutralizzazione del virus per determinare lo stato immunitario di singoli animali o popolazioni dopo la vaccinazione, ma rileva che presenta limitazioni se utilizzato per la prevalenza della sorveglianza delle infezioni, la libertà dei singoli animali dall’infezione prima dello spostamento, il contributo alle politiche di eradicazione e la libertà della popolazione da infezione.
Il test di immunodiffusione su gel di agar è un test disponibile in commercio per la rilevazione di anticorpi contro l’EHDV in campioni di siero di ruminanti domestici e selvatici. Tuttavia, va notato che questo test può reagire in modo crociato con il virus della febbre catarrale (BTV), il che può portare a risultati falsi positivi. Non vengono fornite informazioni specifiche riguardo ai sierotipi rilevati da questo test né alla sua sensibilità e specificità.
Il test di fissazione del complemento (CFT) è un test diagnostico per la rilevazione degli anticorpi contro il virus della malattia emorragica epizootica (EHDV) nei ruminanti domestici e selvatici. È specifico per il sierogruppo ed è stato comunemente utilizzato per la diagnosi di EHDV e la certificazione di animali destinati all’esportazione fino al 1980. Il CFT è particolarmente utile per rilevare infezioni recenti da EHDV ma potrebbe non essere altrettanto efficace per rilevare infezioni più vecchie. La sensibilità del CFT è simile ad altri test sierologici come i test di neutralizzazione del virus (VN) e immunodiffusione su gel di agar (AGID).
Vaccini disponibili
Sono due i vaccini commerciali progettati per proteggere dal virus della malattia emorragica epizootica (EHDV). Il primo, il vaccino EHD 2/6, è prodotto da MedGene negli Stati Uniti e ha come bersaglio i cervi, sebbene non sia specifico per nessun particolare tipo di cervo. Questo vaccino contiene forme ricombinanti inattivate di EHDV2 ed EHDV6 e viene somministrato mediante due iniezioni intramuscolari separate da 2 ml. Questo vaccino è stato approvato dall’USDA per l’uso negli Stati Uniti. Il secondo vaccino, vEHDV-2, è prodotto dai Kyoto Biken Laboratories in Giappone ed è progettato specificamente per proteggere le vacche dall’EHDV2. Questo vaccino utilizza un ceppo virale vivo attenuato e viene somministrato come singola iniezione da 1 ml contenente 106 TCID50 (dose infettiva di colture tissutali) per ml. Questo vaccino è stato approvato per l’uso in Giappone dal 1963.
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